دانلود پایان نامه دکتری: بررسی فقهی فروش اقساطی در نظام بانکداری بدون ربا و شبهات آن و ارائه راهکار (مطالعه مو...
بررسی فقهی فروش اقساطی در نظام بانکداری بدون ربا و شبهات آن و ارائه راهکار (مطالعه موردی بانک ملی ایران)
برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده پایان نامه درج نمی شود
(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)
تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :
(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)
چکیده فارسی
پژوهش حاضر در پی دستیابی به پاسخهایی در رابطه با دو مسئله اساسی است؛ نخست اینکه آیا قرارداد فروش اقساطی مزبور دارای پیشینه فقهی وروایی در فقه شیعه می باشد به گونه ای که بتوان چالشهای فراروی را با نگاهی فقهی و شرعی برطرف نمود یا اینکه از امور مستحدثه می باشد؟ دوم اینکه آیا شبهات فقهی از جمله ربا واکل به باطل که از سوی برخی متوجه این نوع قرارداد میشود در اساس، صحت دارد یا خیر؟ فرضیه ما در بدو ورود به بخش تئوری رساله این بود که قرارداد فروش اقساطی در قانون بانکداری همان عقد مرابحه معروف در فقه وروایات است. بدیهی است که چون بخش میدانی رساله منوط به ملاحظه عینی عملکرد سه گروه سیستم بانکی و کارکنان و مشتریان بانک بوده است از ارائه فرضیه در این زمینه که نوعی پیش داوری در مورد بخش مبهم رساله به شمار می آمد خودداری نمودیم. اما نتایج رساله به این شرح است که اولا قرارداد فروش اقساطی دارای پیشینه روائی و فقهی نزد فریقین بوده که مجموعا تنها پنج روایت صریحا این قرارداد را پوشش داده است. همچنانکه قرارداد مذکور از شمول فتاوی قدمای فقهای شیعه از زمان شیخ کلینی و صدوق نیز بی نصیب نبوده است.در خصوص شبهات فقهی ایراد شده نیز ثابت کردیم که هیچیک از شبهات مزبور شامل شبهه” بیع عینه” و” بیعتین فی بیعه” و” عقد معلق” و”ریسک پذیری” و “ربا” و”بیع مالایملک” و”ما لیس عندالبایع” و” نبود قائل به جواز” وارد نبوده. ضمن اینکه مهمترین وجدی ترین چالشهای فقهی فراروی این قرارداد از جمله خسارت و جریمه تأخیر تأدیه و وکالت بلا عزل و ضمانت شخص ثالث در بانک که معرکه آراء فقها و محققان معاصر می باشد دقیقا بررسی و مطابق با واقعیت موجود در نظام بانکداری جمهوری اسلامی ایران و با عنایت به مبانی فقهی، اولا به بیان شرایط صحت آنها پرداخته و سپس با بیان نقاط ضعف و قوت هر یک حدود و ثغور جواز آنها را مشخص کردیم.وبالاخره دربررسی عملکرد مشتریان و کارکنان بانک اقدام به انجام نظر سنجی از این دو گروه و بررسی میدانی پرونده های امر ثابت شد که آنچه فعلا در نظام بانکداری کشور تحت عنوان قرارداد فروش اقساطی رایج است گرچه به لحاظ عنصر قانونی ایرادی متوجه آن نیست اما به لحاظ دستورالعملها و مندرجات فرمهای مربوطه وعملکرد بانکها و مشتریان با ایرادات ماهوی و شکلی روبروست که در این راستا راهکارهای عملی وپیشنهادات مفیدی در رساله حاضر ارائه شده است.
کلیدواژهها: بیع مرابحه، قرارداد فروش اقساطی، بانک، ربا، خسارت تأخیر تأدیه، جریمه تأخیر تأدیه، روایات.
“فهرست مطالب”
فصل اول: کلیات و مفاهیم. 1
مقدمه. 2
انگیزه پژوهش… 5
اهداف تحقیق.. 6
هدف پژوهش… 6
روش تحقیق و منابع مطالعاتی.. 7
1-1 قرارداد فروش اقساطی.. 9
1-1-1 ضوابط ومقررات قانونی وآیین نامه های قراردادهای فروش اقساطی.. 10
بانکداری بدون ربا واهمیت قرارداد فروش اقساطی.. 10
اهمیت و نقش فروش اقساطی سفارشی در اقتصاد ملی.. 11
1-1-1-1 نحوۀمحاسبۀسوددرمعاملات فروش اقساطی بانکهای ایران. 12
1-1-1-2 نمونه های معاصر و رایج فروش اقساطی مرابحه ای در بانکهای اسلامی.. 14
1-1-1-3 سیر جریان پرونده های فروش اقساطی در بانک… 16
1-1-1-4 فروش اقساطی سفارشی و موارد آن. 18
مواد عمومی مربوط به فروش اقساطی.. 23
ضوابط فروش… 24
ضوابط خرید و فروش وسایل تولید، ماشین آلات و تأسیسات… 25
ضوابط خرید و فروش اقساطی مسکن.. 26
1-2 تاریخچه بحث… 28
بیع مرابحه سفارشی در فقه شیعه. 29
بیع مرابحه سفارشی در فتاوای فقه اهل سنت… 30
دیدگاه محققان معاصر. 30
فصل دوم: احکام وشبهات فقهی بیع مرابحه سفارشی.. 36
2-1 مستند و حکم فقهی بیع مرابحه سفارشی.. 37
مرابحه در لغت و اصطلاح.. 37
بیع مرابحه در اصطلاح فقه. 38
2-1-1 حکم فقهی بیع مرابحه سفارشی.. 40
2-1-1-1 انواع بیع مرابحه. 45
مرابحه بسیط و مرابحه مرکب… 46
وجوه امتیاز مرابحه مرکب از مرابحه بسیط.. 46
مراحل انجام بیع مرابحه برای دستور دهنده به خرید. 47
شروط اختصاصی بیع مرابحه برای دستور دهنده به خرید. 48
2-1-2 بیع مرابحه و حکم فقهی آن. 51
2-1-2-1 تحلیل فقهی روایات بیع مرابحه سفارشی.. 68
بیع کالا پس از تهیه آن. 69
مواعده و عدم الزام به آن. 75
راهکار شرط ضمن عقد. 78
راهکار تعهد سماوی.. 78
مواعده و الزام اخلاقی و قانونی.. 83
راهکار تعهد متقابل ابتدائی.. 84
شرط در لغت و اصطلاح.. 85
مفهوم وعده 95
فرق عقد و عهد و شرط.. 100
تعهدات متقابل و طرفینی و دو راه الزام به آن. 101
خلاصه بحث… 110
2-2 شبهات فقهی بیع مرابحه سفارشی.. 111
2-2- شبهات فقهی بیع مرابحه سفارشی.. 111
2-2-1 شبهه نخست- بیع مرابحه سفارشی،مصداق ربا است. 111
حیله قرض ربوی.. 112
بیع صرف ربوی.. 113
سلف و زیادت… 116
2-2-2 شبهه دوم-شبهه بیع ما لیس عندک.. 123
2-2-3 شبهه سوم- شبهه بیعتین فی بیعه. 124
2-2-4 شبهه چهارم- بیع مرابحه مذکور. 124
2-2-5 شبهه پنجم- شهبه نبود قائل به جواز. 127
2-2-6 شبهه ششم- بیع مرابحه عقد معلّق و باطل است. 128
2-2-7 شبهه هفتم- بیع مرابحه برای دستور دهنده به خرید. 130
2-2-8 شبهه هشتم- بیع مرابحه همان بیع عینه 131
خلاصه فصل.. 136
فصل سوم: قرارداد فروش اقساطی و چالش های فقهی.. 137
3-1 چالش فقهی ضمانت شخص ثالث در قراردادهای فروش اقساطی.. 142
مقدمه. 142
3-1-1 ضمان در فقه و احکام آن. 145
3-1-2 محدوده تعهد و ضمانت ضامن.. 148
محدوده زمانی تعهد و ضمان. 149
نحوه ضمانت ضامن.. 157
راهکار مسأله. 160
خلاصه بحث… 164
3-2 رهن و وثیقه در قرار داد فروش اقساطی.. 165
مقدمه. 165
3-2 رهن و وثیقه در قرار داد فروش اقساطی.. 165
3-2-1 رهن و توثیق در قانون و آئین نامه. 166
تأمین و مفهوم آن. 167
انواع وثیقه ها در قرار دادهای فروش اقساطی.. 167
3-2-2 رهن در فقه و احکام آن. 171
بررسی فقهی رهن در معاملات فروش اقساطی.. 172
3-2-3 محدودیت تصرف در مال مرهون. 177
خلاصه بحث… 183
3-3 ضمانت حسن انجام کار. 185
مقدمه. 185
3-3-1 ضمانت حسن انجام کار در فقه. 186
خلاصه بحث… 195
3-4 چالش فقهی تأثیرتعجیل یا تأجیل قسط در میزان سود. 197
مقدمه. 197
3-4-1 تخفیف سود در پرداخت قبل از سررسید. 198
صور مختلف تعجیل دین و اقساط.. 199
3-4-2 تأجیل اقساط یا دین در برابر افزایش مبلغ آن. 202
خلاصه بحث… 205
خلاصه فصل.. 206
فصل چهارم: قرارداد فروش اقساطی و شروط ضمنی.. 208
4-1 شرط وکالت بلا عزل. 209
شرط وکالت بلاعزل ووفات موکل.. 210
4-1-1 اصل اولی در شک نسبت به صحت شرط.. 210
4-1-2 ویژگیهای عقد وکالت در فقه. 212
ماهیت عقد وکالت… 213
ادله قائلین به صحت شرط عدم عزل. 217
4-1-3 قید وکالت بلا عزل و علل آن. 219
4-1-4 وکالت بلاعزل و وفات موکل.. 224
خلاصه بحث… 228
4-2 چالش فقهی استیفای مطالبات از اموال بستگان مدیونین.. 229
مقدمه. 229
4-2-1 اولیای قهری تصرف و میزان اختیار آنان. 230
ادله قائلین به نفی مصلحت و عدم مفسده 234
خلاصه بحث… 237
4-3 شروط جزائی و تهدیدی.. 238
شرط جزایی و احکام آن. 240
مثال ها و نمونه های شرط جزایی به انواع مختلف آن. 241
شرط جزایی نکول. 241
شرط جزایی تأخیر. 242
شرط جزایی فعل.. 243
شرط جزایی نتیجه. 243
شرط تهدیدی در حقوق وضعی.. 245
مثال ها و نمونه های شرط تهدیدی.. 246
شرط تهدیدی و وجه تمایز آن در فقه شیعه. 246
تاریخچه شرط جزایی و منشأ شکل گیری آن. 247
حکم فقهی شرط جزایی.. 249
شرایط کلی صحت شروط.. 249
تأخیر پرداخت دیون وتبعات منفی آن. 251
اختلال در برنامههای اقتصادی بانکها و مؤسسات مالی.. 251
گسترش تخلفات مالی و سلب اعتماد عمومی.. 252
سنگین شدن وثیقهها و ضمانتها 253
افزایش نرخ سود تسهیلات بانکی.. 253
از دست دادن مشتریان ممتاز. 253
حکم فقهی و شبهات شرط جزایی.. 254
4-3-1 خسارت تأخیر تأدیه. 255
مشکل تأخیر تأدیه در قوانین ایران. 255
تأخیر تأدیه در قوانین ایران قبل از انقلاب اسلامی.. 255
تأخیر تأدیه در قوانین ایران بعد از انقلاب… 257
الف- الغای قوانین و آیین نامههای مربوط به خسارت تاخیر تأدیه قبل از انقلاب… 257
ب – موافقت شورای نگهبان با دریافت جریمه تأخیر تأدیه توسط بانکها 259
ج– موافقت مجمع تشخیص مصلحت با توسعه دریافت جریمه تأخیر توسط بانکها 261
د ـ جواز دریافت خسارت تأخیر تأدیه برای دارندگان چک… 263
وـ جواز دریافت خسارت تأخیر تأدیه از خارجیان. 267
جمعبندی قوانین و مقررات ایران درباره خسارت تأخیر تأدیه: 268
ادله جواز خسارت تأخیر تأدیه. 272
الف- قاعده علی الید. 272
ب – قاعده احترام. 273
ج- قاعده الغنم بالغرم. 273
د- قاعده الخراج بالضمان. 275
این مطلب را هم بخوانید :
ه- آیه”لاتظلمون ولاتظلمون”. 276
و- قاعده غصب: 276
ز- لزوم وفا در مقام پرداخت کل ثمن به بایع. 278
ح- قاعده لاضرر. 279
ط- قاعده اتلاف: 282
نتیجه بحث… 297
4-3-1-1 شرط خسارت تأخیر تأدیه و ادله آن. 302
– قاعده شروط.. 302
– روایات خاص از فریقین.. 302
4-3-1-2 شبهات فقهی شرط خسارت تأخیر تأدیه. 304
شبهه ربا 304
شبهه عدم تفکیک طبقات بدهکار. 311
شبهه تشویق مشتریان به تخلف… 314
خلاصه بحث… 315
4-3-2 شرط جریمه تأخیر تأدیه. 316
4-3-2-1 شبهات فقهی شرط جریمه دیرکرد. 318
شبهه ربای قرضی.. 319
شبهه ربای جاهلی(ربای نسیه) 321
شبهه حیله ربا 324
خلاصه بحث… 329
4-3-3 شرط جریمه تخلف از قرارداد. 330
4-3-3-1 حکم فقهی جریمه تخلف… 331
4-3-3-2 تعدیل جریمه یا خسارت تأخیر. 334
4-3-3-2-1 تخفیف خسارت… 334
4-3-3-2-2 افزایش خسارت… 335
4-3-3-3 خسارت از خسارت یا خسارت مرکب… 338
4-3-3-3-1 حکم فقهی خسارت از خسارت… 339
خلاصه بحث… 342
4-3-4 شرط حلول مطالبات… 344
4-3-4-1 شرط حلول دین و حکم فقهی آن. 345
4-3-4-2 شرط حلول مطالبات در مورد سایر تخلفات… 357
4-4 چالش فقهی شرط محدودیت تصرف… 360
4-4-1 مؤدای شرط در عقود. 360
وجه تمایز شرط مخالف مقتضا از شرط مخالف کتاب و سنت… 361
وجه تمایز مصادیق مقتضای بلاواسطه از مقتضای ثانویه. 362
ملاک آیت الله خویی.. 362
ملاک محقق کرکی.. 363
ملاک شیخ انصاری.. 365
ملاک محقق کمپانی.. 366
4-4-2 شرط عدم انتقال مبیع در مدت اقساط و محدودیت تصرف… 368
4-4-2-1 شرط عدم انتقال کالا به شخص ثالث… 368
4-4-2-2 شرط عدم بکارگیری کالا در شغل دیگر مشتری.. 372
روایات تحلیل و تحریم و مخالفت کتاب… 374
شرط بانکی و مخالفت با کتاب و سنت… 376
مصادیق مخالفت با حکم خدا 378
خلاصه بحث… 381
4-5 ماهیت فرم قرارداد فروش اقساطی در رویه عملی بانک… 382
4-5-1رویه عملی بانک در تنظیم قرارداد نهایی فروش اقساطی.. 383
4-5-1-1 راهکارها 383
خلاصه بحث… 392
خلاصه فصل.. 393
نتیجه گیری رساله. 398
راهکارها و پیشنهادات رساله. 411
الف– راهکارهای مقابله با مشتریان متعمد در تأخیر یا نکول پرداخت… 412
ب- راهکارهای مقابله با متخلفان بدون سوء نیت(موسر مهلت خواه ومعسر) 415
ج- راهکارهای مقابله با معاملات صوری.. 417
د- راهکارهای مربوط به وثیقه بانکی.. 419
ه- راهکارهای مر بوط به ضامن ها 420
و- راهکارهای مربوط به کالا. 421
ز- راهکار مربوط به وکالت بلاعزل. 423
ح- راهکارهای مربوط به بانکها 423
*فرمهای پیشنهادی نگارنده برای قراردادهای بانکی فروش اقساطی حسب مورد آن:*. 425
کتابنامه. 437
پیوستها 453
پایان نامه ارشد:بررسی نسبت جمعیتی اسپرمهای واجد کروموزم Xو Y تحت تأثیر برخی عوامل محیطی در گونه گاو ...
3-2-4- واکنش Real-Time PCR…………………………………………………………………. 71
3-2-4-1- – هدف از انجام واکنش Real-Time PCR………………………………………… 71
3-2-4-2- مواد و لوازم برای واکنش Real-Time PCR………………………………………. 71
3-2-4-3- روش انجام واکنش Real-Time PCR………………………………………………. 72
3-2-4-3-1- رقیقسازی آغازگرها……………………………………………………………………… 72
3-2-4-3-2- محاسبه مقادیر در واکنش Real-Time PCR…………………………………. 73
3-2-4-3-3- تعیین شرایط دمایی و زمانی واکنش Real-Time PCR……………………. 73
3-2-4-3-4- رسم منحنی استاندارد از طریق واکنش Real-Time PCR………………… 74
3-2-4-3-5- بررسی CT و TM از طریق واکنش Real-Time PCR……………………. 74
3-2-4-3-6- آمادهسازی مخلوط واکنش Real-Time PCR…………………………………. 76
3-2-4-3-7- آنالیز دادههای واکنش Real-Time PCR………………………………………. 76
فصل چهارم : نتایج
4-1- نتایج استخراج DNA …………………………………………………………………………… 78
4-1-1- نتیجه الکتروفورز محصولات استخراجDNA………………………………………….. 78
4-1-2- نتیجه غلظتخوانی با دستگاه نانودراپ…………………………………………………….. 79
4-2- نتیجه الکتروفورز محصولات PCR…………………………………………………………… 80
4-3- نتایج حاصل از Real-Time PCR………………………………………………………… 82
4-3-1- منحنی استاندارد……………………………………………………………………………………. 82
4-3-2- منحنی ذوب و محاسبه TM…………………………………………………………………… 83
4-3-3- منحنی تکثیر و محاسبه CT…………………………………………………………………. .87
4-3-4- نتیجه الکتروفورز محصولات Real-Time PCR……………………………………….. .90
4-3-5- آنالیز کمّی دادهها………………………………………………………………………………….. 94
فصل پنجم : بحث وپیشنهادات
5-1- بحث ………………………………………………………………………………………………. .99
5-2- پیشنهادات……………………………………………………………………………………. 102
منابع ………………………………………………………………………………………………………… 103
چکیده انگلیسی …………………………………………………………………………………………. 106
ضمایم ………………………………………………………………………………………………………… 108
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول(3-1):شماره ثبت شده دام روی پایوتهای محتوی مایع منی………………………….………. 58
جدول(3-2): مواد تشکیل دهنده محلول PBS ………………………………………………………… 60
جدول(3-3): مواد تشکیل دهنده محلول Lysis Buffer ………….………………………………… 62
جدول(3-4): اطلاعات مربوط به آغازگرها ……………………………………………………………….. 68
جدول(3-5): مقادیر مواد واکنش PCR ………………………………………………………………… 69
جدول(3-6): شرایط دمایی و زمانی واکنش PCR ……………………………………………………. 70
جدول(3-7): مقادیر مواد واکنش PCR ………………………………………………………………… 73
جدول(3-8): شرایط دمایی و زمانی واکنش PCR Real-Time ……….…………………….…… 74
جدول (4-1):غلظت DNA ( ng.µl-1 ) برای 7 رأس گاو در فصل سرد…….…………………….… 79
جدول (4-2): غلظت DNA ( ng.µl-1 ) برای 7 رأس گاو در فصل گرم…….…………….………… 79
جدول (4-3) : محاسبه میانگین عدد CT بین دو تکرار در هر نمونه……….…………….………..… 95
جدول (4-6) : عدد مقیاس مطلق(تفاوت عدد الگوی اولیه ژن SRY و PLP ….………………… ………………97
فهرست اشکال
عنوان صفحه
شکل (1-1) : اسپرماتیک کورد(بند بیضه) …………………………………………………………… 6
شکل (1-2) : اسکروتوم (کیسه بیضه) ………………………………………………………………… 7
شکل (1-3) : بیضه ها در گاو …………………………………………………………………………. 8
شکل (1-4) : بیضه ها ولوله های اسپرم ساز و شبکه رته تستیس ………………………………… 10
شکل (1-5) : اپیدیدیم ………………………………………………………………………………… 11
شکل (1-6) : غدد ضمیمه تناسلی …………………………………………………………………… 13
شکل (1-7) : آلت تناسلی گاو نر …………………………………….……………………………… 14
شکل (1-8) : اسپرماتوژنز ……………………………………………………………………………… 16
شکل (1-9) : اسپرماتوژنز و هورمونها ………………………………………………………………. 17
شکل (1-10) : مراحل سلولی اسپرماتوژنز …………………………………………………………… 19
شکل (1-11) : اسپرم …………………………………………………………………………………. 20
شکل (1-12) : کاریوتیپ گاو ………………………………………………………………………… 22
شکل (1-13) : اسپرم واجد کروموزوم Y و X ……………………………………………………… 24
شکل( 1-14) : مکانیسم عمل رنگ SYBR-Green طی واکنش زنجیرهای پلیمراز(PCR)……33
شکل( 1-15) : مکانیسم عمل شناساگرهای دوسویه نشاندار یا شناساگرهای TaqMan ………………..36
شکل( 1-16) : مکانیسم عمل شناساگرهای بیکون مولکولی طی واکنش زنجیرهای پلیمراز(PCR)…….… 37
شکل( 1-17) : مکانیسم عمل شناساگر FRET طی واکنش زنجیرهای پلیمراز(PCR) ……… 38
این مطلب را هم بخوانید :
شکل( 1-18) : مکانیسم عمل شناساگر عقربی طی واکنش زنجیرهای پلیمراز(PCR)…..……… 40
شکل (1-19) : منحنی تکثیر در واکنش Real-Time PCR ………………………………..… 42
شکل (1-20) : رنگ مرجع خنثی) (ROX ……………………………………………………… 43
شکل (1-21) : منحنی تکثیر و نمایش CT ………………………………………………………. 44
شکل (1-22) : منحنی ذوب و Tm ………………………………………………………………… 46
شکل (1-23) : منحنی استاندارد ……………………………………………………………………. 48
شکل(3-1):پایوتهای محتوی مایع منی …………………………………………………………… 58
شکل (4-1) : نتایج حاصل از استخراج DNA …………………………………………………… 78
شکل( 4-2 ): نتایج حاصل از PCR ……………………………………………………………….. 81
شکل (4-3) : منحنی استاندارد …………………………………………………………………….. 82
شکل( 4-6 ): منحنی ذوب و میزان Tm محاسبهشده برای آغازگر SRY در فصل گرم …….. 84
شکل( 4-7 ): منحنی ذوب و میزان Tm محاسبهشده برای آغازگر SRY در فصل سرد ……. 84
شکل( 4-8 ): منحنی ذوب و میزان Tm محاسبهشده برای آغازگر PLP در فصل گرم ……. 85
شکل( 4-9 ): منحنی ذوب و میزان Tm محاسبهشده برای آغازگر PLP در فصل سرد ……. 85
شکل( 4-10 ): منحنی ذوب و میزان Tm محاسبهشده برای آغازگر PARدر فصل گرم……. 86
شکل( 4-11 ): منحنی ذوب و میزان Tm محاسبهشده برای آغازگر PARدر فصل سرد……. 86
شکل( 4-12 ): منحنی تکثیر و میزان CT مربوطه برای آغازگر SRY در فصل گرم ………….87
شکل( 4-13 ): منحنی تکثیر و میزان CT مربوطه برای آغازگر SRY در فصل سرد………… 87
دانلود پایان نامه ارشد:بررسی وجود ژن اسکوالن اپوکسیداز در قارچ درماتوفیت ترایکوفایتون ویولاسئوم...
1-4-7 اپیدمیولوژی: 31
1-4-8 درمان: 32
1-5 مطالعات بیولوژی مولکولی: 33
1-5-1 بیولوژی اسکوالن اپوکسیداز (SE) (منواکسیژناز): 38
1-5-2 ویژگی استرولها و نقش اسکوالن اپوکسیداز: 39
1-5-4 مکانیسم اثرات داروهای ضد قارچی بر ارگوسترول. 46
1-5-5 بررسی مولکولی اسکوالن اپوکسیدازدرقارچها و رابطه آن با مقاومت دارویی: 48
فصل دوم–مواد و روش ها: 52
2-2 طراحی پرایمرها: 55
2-2-1 آماده سازی پرایمرها: 56
2-3 استخراج DNA: 57
روش کار: 57
2-4 تکثیر ژن سنتزکننده آنزیم اسکوالن اپوکسیداز توسط PCR: 59
2-5 خالصسازی محصولات PCR: 60
این مطلب را هم بخوانید :
فصل سوم–نتایج: 63
3-1 بررسی ماکروسکوپی قارچ درماتوفیت ترایکوفایتون ویولاسئوم. 64
3-2 بررسی میکروسکوپی (ریزبینی) قارچ درماتوفیت ترایکوفایتون ویولاسئوم. 64
3-3 : کشت انبوه در محیط SCC مایع.. 64
3-4 استخراج DNA.. 64
3- 5 محصول PCR.. 65
3-7 تعیین توالی ژن اسکوالن اپوکسیداز در قارچ درماتوفیت ترایکوفایتون ویولاسئوم. 65
فصل چهارم–بحث و پیشنهادات… 70
1-4- بحث… 71
4-2- پیشنهادات: 77
Refrences: 78
فهرست اشکال
شکل (3-1-1) سطح کلنی قارچ ترایکوفایتون ویولاسئوم در محیط جامد SCC.. 66
شکل(3-2-1) منظره ریزبینی قارچ ترایکوفایتون ویولاسئوم با درشت نمایی 40×. 66
شکل (3-4). 67
شکل (3-5). 67
شکل (3-6) همولوژی سکانس پروتئین آنزیم اسکوالن اپوکسیداز در قارچ ترایکو فایتون ویولاسئوم با سایر موجودات 77
چکیده
قارچviolaceum Trichophyton مسئول اپیدمیهای بسیاری از عفونتهای درماتوفیتی می باشد.
ترایکوفایتون ویولاسئوم در انسان ایجاد کچلی بدن، پا، ناخن و دست می کند.همچنین به موها حمله و ایجاد کونیدیاهایخارج و داخل مو(اکتواندوتریکس) میکند. کلونیزه شدن درماتوفیتها محدود به بافت های کراتینه و مردۀ لایه شاخی بوده و ممکن است منجر به واکنش های التهابی خفیف تا شدید گردد .ایمنی هومورال،سلولی و نیز دفاع غیراختصاصی میزبان علیه درماتوفیت ها فعال بوده که می توانند باعث حذف قارچ گردند و درنتیجه از پیشرفت عفونت به سمت بافتهای تحتانی جلوگیری نمایند.خصوصیات و ویژگیهای متعددی از این قارچ تاکنون مورد بررسی واقع شده اما در زمینه بیولوژی مولکولی این قارچ مطالعات محدودی انجام گرفته است.موجودات زنده چه پرسلولی و چه تک سلولی بوسیله غشایی احاطه می شوند که آنها را از محیط اطرافشان مجزا می سازد.ترکیب این غشاء بسیار مهم است چرا که در حفظ و پایداری غشاء دخیل می باشد.استرولها یکی از ترکیبات لازم در تمام سلولهای یوکاریوتی می باشد که البته در سلولهای قارچی نوع ارگوسترول آن موجود است.این ترکیب در فعالیتهای مختلفی از جمله در تعدیل سیالیت غشاء، تراوایی و فعالیت آنزیمهای باند شده به غشاء، تنظیم چرخه سلولی و فتواکسیداسیون مؤثر می باشد.از آنزیمهای مؤثر در بیوسنتز این ترکیب، می توان به اسکوالن اپوکسیداز اشاره کرد. این آنزیم در مسیر بیوسنتزارگوسترول مهم می باشد و برای فعالیت به مولکول FAD و NADPH واکسیژن احتیاج دارد .این آنزیم هدف برخی از داروهای ضد قارچی می باشد.عفونتهای درماتوفیتی معمولا به درمان های ضد قارچی موضعی پاسخ میدهند.هرچند در درمان عفونتهای شدید و موارد کچلی پا و ناخن درمانهای موضعی بی ارزش است.همچنین در مواردی که بیماری به فرم مزمن تبدیل میشود درمان های معمول با داروهای ضد قارچی به خوبی پاسخ نمیدهند.بر همین اساس شناخت و وجود این ژن و همچنین مسیرهای متابولیکی آن اقدامی مهم در جهت ساخت دارو یا داروهای مفید ضد این میکروارگانیسم میباشد.
فصل اول
دیباچه
1- 1- کلیات قارچشناسی:
واژه قارچ، برگردان کلمه لاتین Fungus میباشد که برای اولین بار در قرن 15 میلادی مورد استفاده قرارگرفت. ریشه لاتین واژه Fungus، خود از کلمه یونانی spongris گرفته شده است. همچنین اصطلاح Mycology از لغت یونانی Mykes که به معنای قارچ خوراکی است، مشتق شده است.(89)
مطالعات انجام شده نشان میدهند که قارچها بسیار پیشتر از آنچه که تاکنون تصور میشده، بوجود آمدهاند.. اخیراً محققین دریافتهاند که قارچها حدود 1300 میلیون سال پیش به وجود آمدهاند ، در صورتیکه تاکنون تصور میشد قارچها 480 میلیون سال قبل به وجود آمدهاند. (89)
قارچها جزء اولین میکروارگانیسمهای شناخته شده هستند زیرا ساختارهای زایشی اغلب آنها (مانند قارچهای خوراکی) به حدی بزرگ بوده که بدون میکروسکوپ به راحتی دیده میشوند. این موجودات یکی از اجزاء مهم چرخه مواد بوده زیرا به عنوان یکی از اصلیترین تجزیهکنندگان مواد آلی در طبیعت به شمار میروند. (89)
قارچها یوکاریوت بوده و ارگانیسمهای غیرمتحرک و فاقد تاژک میباشند. همگی آنها از رویش هاگ یا اسپور (spore) بوجود میآیند. این ویژگیها براساس طبقهبندی ویتاکر (whittaker) در سال 1969 میلادی است. (86)
قارچها دارای هسته واقعی و دیواره سلولی مشخص هستند و فاقد رنگدانه کلروفیل بوده و اسپور یا کنیدیای آنها به طریق جنسی و یا غیرجنسی تولید میشود.(86)
تقریباً تمام قارچها هوازی بوده و از نظر تغذیه همگی هتروتروفند. قارچها غذای خود را هضم نمیکنند بلکه بوسیله ایجاد عفونت در سایر موجودات زنده و یا رشد بر روی بقایای مواد آلی در حال فساد، مواد لازم را کسب میکنند که گروه اول را پارازیت و گروه دوم را ساپروفیت مینامند. (86) اکثر قارچ ها حتی آنهایی که بیماری زا هستند نیز قادر هستند در محیط های کشت آبگوشت و یا ژلوز رشد نمایند.(86)
سنتز اسید آمینه لیزین در قارچ ها از مسیر ال آلفا آمینو آدپیک اسید(AAA) صورت می پذیرد.به جز پیتیوم اینسیدیوزوم(Pythium insidiosum) که به دلیل داشتن اسپور متحرک، آن را از اومیست ها
پایان نامه ارشد:بررسی وجود و تعیین هویت فاکتورهای پاتوژنیسته در سویه های اشرشیا کلی یوروپاتوژن جدا شد...
فهرست جدول ها
| عنوان جدول صفحه |
| جدول 1-1: ژن های ویرولانس در اشرشیا کلی و عملکرد ژن ها………………………………………………………………………………………………………………….30 جدول3-1: مشخصات پرایمرهای مورد استفاده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………..48 جدول 3-2: اجزاء و ترکیبات مورد استفاده برای واکنش PCR ……………………………………………………………………………………………………………………..49 جدول 3-3: برنامه دمایی ترموسایکلر برای ژن aer ………………………………………………………………………………………………………………………………………….50 جدول 3-4: برنامه دمایی ترموسایکلر برای ژن HlyA………………………………………………………………………………………………………………………………………51 جدول 3-5: برنامه دمایی ترموسایکلر برای ژن Pap ………………………………………………………………………………………………………………………………. 52 جدول 3-6: برنامه دمایی ترموسایکلر برای ژن Cnf ……………………………………………………………………………………………………………………………………..52 جدول 3-7: برنامه دمایی ترموسایکلر برای ژن Afa …………………………………………………………………………………………………………………………………………53 جدول 3-8: برنامه دمایی ترموسایکلر برای ژن Fim………………………………………………………………………………………………………………………………………..54
جدول 4-1: مشخصات ایزوله های اشرشیا کلی جدا شده از بیماران……………………………………………………………………………………………………………73 جدول 4-2: نتایج ویرولوتایپینگ درکل سویه ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………………77 جدول4-3: نتایج ویرولوتایپینگ در سویه های اشرشیا کلی، سویه های مشابه در هر ژن……………………………………………………………………….78
|
فهرست علامت ها و اختصارها
| معادل فارسی معادل انگلیسی علامت | |
| این مطلب را هم بخوانید : | پخش سریال دیوار در شبکه جام جم اشرشیا کلی Escherichia coli E.coli واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR Polymerase chain reaction عفونت مجاری ادراری Infectios UTI Urinary Tract اشرشیا کلی یوروپاتوژن UPEC Uropathogenic Escherichia coli |
فهرست شکل ها و تصویر ها
دانلود پایان نامه:بهینه سازی فرآیند تولید پروتئینهای نوترکیب در سیستم بیان موقت TG...
1-32-3)نقش عناصر میکرو در محیط کشت… 42
1-33)نقش گلوتامین در محیط کشت… 44
2-2) میکروارگانیسم ها و سلول های مورد استفاده 47
2-3)لیست کامل مواد استفاده شده 48
2-4) لیست کامل وسایل مورد استفاده 50
2-5) شرایط لازم جهت انجام کشت سلول rCHO DG44. 50
2-5-1)محیط های کشت جهت فرایند بهینه سازی.. 51
2-5-1-1)تهیه محیط کشت BRC.. 51
2-5-1-2)ذخیره سازی سلول ها و محیط های کشت… 51
2-6)آماده سازی سلول هایrCHO DG44. 52
2-7) دفریز نمودن سلولهایrCHO DG44. 52
2-8) انکوباسیون سلول هایrCHO DG44. 53
2-8-1)انکوباتور دی اکسید کربن.. 53
2-8-2)دمای انکوباتور جهت کشت سلول rCHO DG44. 53
2-8-3) میزان co2 انکوباتور جهت کشت سلول rCHO DG44. 54
2-8-4) رطوبت انکوباتور جهت کشت سلول rCHO DG44. 54
2-9) استریلیزاسیون انکوباتور. 54
2-10) آنتی بیوتیک ها و آنتی مایکوتیک ها 55
2-10-1) میزان مصرف آنتی بیوتیک… 55
2-11) کشت سلول های rCHO DG44. 56
این مطلب را هم بخوانید :
2-12)ارزیابی وضعیت محیط کشت از نظر pH.. 56
2-13) شمارش سلول های rCHO DG44. 57
2-13-2)تعیین درصد سلول های زنده Viability)) 59
2-13-3) انجماد سلولها و ذخیره سازی آنها Cell Freezing)) 59
2-14)ترانسفکشن سلول rCHO DG44. 60
2-15)بهینه سازی فرایند TGE. 61
2-15-1)ترانسفکشن به روش PEI 61
2-15-2)بررسی میزان بهینه دانسیته سلولی جهت انجام TGE. 61
2-15-3)بررسی میزان بهینه DNA جهت انجام TGE. 62
2-15-4)اندازه گیری میزان درصد ترانسفکشن.. 62
2-15-4-1)اندازه گیری GFP به روش فلوسایتومتری.. 62
2-16)افزودن غلظت های متفاوت پپتون های گیاهی به محیط های کشت… 62
2-16-2)تعیین پروفایل بیان به روش Elisa. 70
2-16-2) بررسی تغییرات رفتار متابولیک سلول ها 72
3-1)ترانسفکشن سلول های rCHO DG44 به روش TGE. 76
3-1-1)بررسی میزان بهینه PEI جهت انجام TGE. 76
3-1-2)بررسی میزان بهینه دانسیته سلولی جهت انجام TGE. 83
3-1-3)بررسی میزان بهینه DNAجهت انجام TGE. 96
3-2)تعیین الگوی رشد سلول های CH0 DG44 در محیط های کشت ProCHO 5,CD DG44و BRC.. 109
3-3)غلظت پپتون ها وابسته به نوع محیط کشت… 110
3-4)بررسی تغییرات متابولیکی در سلول های CHO DG44 تولید کننده t-PA.. 115
3-4-1)بررسی تغییرات متابولیکی در محیط ProCHO 5. 115
3-4-2)تغییرات متابولیکی در محیط CD DG44. 117
3-4-3) بررسی تغییرات متابولیکی در محیط BRC CD.. 118
3-5)بررسی تاثیر پپتون ها بر میزان بیان پروتئین نوترکیب… 119
3-6)بررسی تاثیر استراتژی تغذیه با پپتون های گیاهی در بهینه سازی TGE. 121
Optimization of recombinant protein production in TGE system… 137
چکیده
بیماری عروق کرونر قلب یکی از شایع ترین بیماری ها در سطح جهان به خصوص کشور های صنعتی می باشد.
فعالکننده پلاسمینوژن بافتی (t-PA( Tissue Plasminogen Activator، یک پپتید طبیعی است که با اتصال به فیبرین موجود در لخته و تبدیل پلاسمینوژن به پلاسمین باعث شکسته شدن فیبرین، فیبرینوژن و سایر پروتئینهای انعقادی شده و با رفع انسداد باعث به حداقل رساندن آسیب بافتی و در نهایت نجات بیمار میشود. پروتئین مورد بررسی در این مطالعه فرم کوتاه شده موتانت از داروی t-PA باخواص فارماکولوژیک بهینه می باشد که در میزبان بیانی CHO(Chinese Hamster Ovary) با هدف تغییرات پس ترجمه ای مناسب و مشابه فرم طبیعی بیان می شود.
بیان موقت پروتئین(Transient Gene Expression) TGE روش رایجی برای بیان پروتئین های نو ترکیب در بازه زمانی کوتاه و در مقیاس مناسب جهت انجام تست های پیش بالینی Preclinical)) می باشد.در این مطالعه از این روش و بهینه سازی آن برای تولید پروتئین نوترکیب t-PA استفاده شد و مقادیر بهینه شده برای میزان cell DNA106/µg2 وبرای عامل انتقال ژن Transfection reagent)) cell 106/µg5/1 و میزان سلول مورد استفاده 105×5 سلول معین گردید.همچنین با دیدگاه Scale-up در بیوپروسه و اثر استراتژی های تغذیه ای با عوامل پپتونی مختلف بر میزان بیان و رشد پروتئین و تغییر رفتار متابولیک آن بررسی گردید.به منظور بهینه سازی بیان فعالکننده پلاسمینوژن بافتی (t-PA)در سلول CHO در این فرایند از 6 پپتون با منشا گیاهی(Soy,Casein) مختلف استفاده گردید .آنالیز نتایج نشان داد که چگونگی تاثیر پپتون ها بر روی بیان ژن مورد نظر در سلول CHO در تعدادی از پپتون ها از الگوی خاصی تبعیت می کند.در برخی موارد اثر مثبت و در موارد خاصی تاثیر منفی داشته است , که احتمالا این تاثیرات ناشی از ماهیت ترکیب آمینو اسیدی پپتون های به کار رفته می باشد. همچنین استفاده از این ترکیبات پپتونی در محیط کشت سلول ترانسفکت شده علاوه بر افزایش بیان پروتئین می تواند سبب کاهش تولید متابولیت های نامطلوب نیز شود.
واژه های کلیدی: سلول CHO , t-PA , فیبرینولیز ,فیبرینوژن
مقدمه
1-1)اهمیت پروئینهای نوترکیب – جایگاه جهانی و درمانی
پروتئین ها ماکرومولکولهایی هستند که در هرجایی از سلولها جای می گیرند.آنها در رشد سلولی، متابولیسم، سازماندهی، انتقال و جهش نقش دارند. در ارگانیسم های چندسلولی، پروتئین ها سیستم ایمنی، سیگنال بندی عصب، رشد و تقسیم کل ارگانیسم را کنترل می کنند.جهش یا رونویسی غیرعادی پروتئین ها می تواند منشاء بیماریهای بسیاری شود. با توجه به اینکه ژنوم انسان حاوی بیش از 30.000 ژن است و اینکه تعداد پروتئین هایی که تولید می شوند حتی بیشتر از این مقدار هستند،فرصت هایی برای شرکت های داروسازی به دست آمده تا داروهای جدیدی را توسعه دهند که بسیار فراوان هستند. بنابراین در طول دهه های گذشته،پروتئین ها به اهدافی برای توسعه درمانهای جدید تبدیل شدند. وقتی که پروتئین ها اولین بار به عنوان موارد درمانی مورد استفاده قرار گرفتند، از منابع انسانی و حیوانی خالص سازی شدند. نمونه هایی از این قبیل شامل هورمون رشد انسان از جسد انسان، انسولین از گاو یا خوک و هورمون تحریک کننده غدد ترشحی انسان از اوره می شدند. به هر حال استفاده از این منابع با نگرانی هایی هم همراه بود.خوشبختانه امروزه محصولات منابع حیوانی کمتر به کار می روند. در واقع از اواخر دهه 1970، رشد در بیوتکنولوژی امکان تولید پروتئین از “DNA دارای صفات ارثی” با استفاده از سیستم های میزبان پروکاریوتی یا یوکاریوتی را فراهم کرده است.این پروتئین ها ، دارای صفات ارثی هستند و از پروتئین های داخلی قابل تمایز هستند، آنها بواسطه رونویسی ژنهایی که دارای صفات ارثی جدید هستند، تولید می شوند. اولین پروتئین نوترکیب، که برای انسان به کار رفت انسولین بود که در E.coli توسط Eli Lili در سال 1984 تولید شد. اولین پروتئین نوترکیب تولید شده در میزبان یوکاریوتی ، فعال کننده پلاسمینوژن بافتی t-PA از سلولهای تخمدان هامستر چینی CHO2 بود که در سال 1986 تولید شد. در سال 2007، بیش از 170 محصول بیودارویی وجود داشت که توسط انجمن دارو و غذا FDA